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•26专业课-西综笔记生物化学常用的分子生物学技术✔
在准备2026年专业课，特别是西医综合（西综）的生物化学部分时，掌握常用的分子生物学技术对于理解现代生物研究方法至关重要。以下是一些核心的分子生物学技术，这些内容通常会出现在生物化学的学习和考试中：聚合酶链反应（PCR）:用于扩增特定DNA片段，是分子生物学中最基础且广泛使用的实验技术。它能从少量DNA样本中大量复制目标序列。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）:用于将RNA转换为cDNA，进而通过PCR技术扩增，适用于研究基因表达水平。克隆技术:包括将目的基因插入到载体中，如质粒，然后转入宿主细胞，用于生产大量目的蛋白或进行基因功能研究。蛋白质相互作用研究:如酵母双杂交系统，用于探索蛋白质间的相互作用。掌握这些技术的原理、步骤和应用，对于深入理解生物化学和分子生物学的实验部分至关重要。
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生物实验技术干货 | 分子互作、基因检测全梳理
学生物的宝子看过来！整理了分子生物学实验中 PCR、蛋白互作、基因表达检测 等核心技术，速码收藏👇
一、PCR 技术（基础又核心）
- 反应体系
：模板 DNA + 特异 DNA 引物 + 耐热 DNA 聚合酶（Taq 酶） + dNTP + Mg²⁺缓冲液 - 特异性关键
：依赖特异 DNA 引物（非 RNA 引物），引物设计决定成败！ - 主要应用
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✔️ 基因克隆：体外大量扩增目标 DNA 片段
✔️ 基因表达检测：RT-PCR（RNA 逆转录后扩增）、实时定量 PCR（精准定量）
✔️ DNA 序列分析：结合测序技术简化流程
✔️ 基因突变分析：检测突变、重排（如单链构象多态性分析）
✔️ 基因体外突变：通过引物设计实现点突变、缺失、嵌合改造
二、蛋白质 – 蛋白质互作研究
想研究蛋白间 “亲密关系”？这些方法收好～
常用方法
- 酵母双杂交系统
：经典筛选，找细胞内互作蛋白 - 免疫共沉淀（Co-IP）
：抗体 – 抗原结合，捕获互作蛋白 - GST Pull-down
：利用谷胱甘肽标签蛋白，钓取互作小伙伴 - 荧光能量共振转移（FRET）
：通过分子距离变化，“看” 到互作 - 噬菌体展示技术
：噬菌体表面展示，筛选互作蛋白
排除干扰技术
- 蛋白质印迹（Western blotting）
：检测蛋白表达量，非互作研究！ - 基因剔除技术
：研究基因功能，和蛋白互作无关，别搞混～
三、DNA – 蛋白质互作研究
研究 DNA 和蛋白的 “互动”，这俩技术必懂！
常用技术
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电泳迁移率变动测定（EMSA / 凝胶迁移分析）：
原理：标记 DNA 探针 + 蛋白质结合 → 电泳迁移率改变
用途：体外检测 DNA – 蛋白结合 -
染色质免疫沉淀法（ChIP）：
原理：体内交联后，抗体富集 DNA – 蛋白复合物并测序
用途：研究体内特定蛋白与基因组 DNA 结合位点（如启动子区域）
排除干扰技术
- 酵母双杂交
：只用于蛋白 – 蛋白互作，别套用到 DNA – 蛋白！ - 酶联免疫吸附测定（ELISA）
：基于抗原 – 抗体反应，和核酸无关～
四、基因表达检测技术
RNA 检测
- Northern blotting（RNA 印迹）
：测特定 RNA（mRNA、非编码 RNA）表达水平 - RT-PCR（逆转录 PCR）
：mRNA 逆转录为 cDNA 后扩增，实现 RNA 定量
蛋白质检测
- Western blotting（蛋白质印迹）
：检测蛋白表达量，还能半定量分析
五、印迹技术总结（超全对比）
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记忆口诀：南 D 北 R 西蛋白！（ Southern – DNA、Northern – RNA、Western – 蛋白质 ）
六、其他重要技术
基因启动子结构分析
技术组合：PCR 结合测序（获启动子序列） + 核酸 – 蛋白互作技术（EMSA、ChIP，研究转录因子结合） + 生物信息学预测（启动子数据库分析）
DNA 测序技术
- Sanger 双脱氧法（链末端合成终止法）：经典测序方法，基于 ddNTP 终止链延伸
